Lichtabhängige Phosphorylierung des TRP-Ionenkanals

Die visuelle Transduktionskaskade bei Drosophila melanogaster ist eine der schnellsten bekannten G-Protein-vermittelten Signalkaskaden. Sie gipfelt in der Öffnung des transient receptor potential (TRP)-Kanals. Letzterer gehört zur großen Proteinfamilie der TRPC-Kanäle. Wie viele andere Ionenkanäle wird TRP posttranslational modifiziert. Wir haben kürzlich 21 Phosphorylierungsstellen des Drosophila-TRP-Kanals identifiziert. Mindestens acht dieser Stellen werden lichtabhängig phosphoryliert. Das vorgeschlagene Projekt hat die Beleuchtung der physiologischen Rolle der identifizierten TRP-Phosphorylierungsstellen zum Ziel. Wir werden die Regulation der Phosphorylierung/Dephosphorylierung einzelner Stellen sowie den Zusammenhang zwischen dem Phosphorylierungszustand und der subzellulären Lokalisation der Ionenkanäle untersuchen. Wir werden die identifizierten Phosphorylierungsstellen durch ortsgerichtete Mutagenese ausschalten, die mutierten trp-Konstrukte in transgenen Fliegen exprimieren und die Effekte der Mutationen analysieren. Um Kinasen und Phosphatasen des TRP-Proteins zu identifizieren, werden wir eine LC-MS/MS-Analyse in Kombination mit einem Screen mit Kinase- und Phosphatasemutanten durchführen. Die gesammelten Erkenntnisse sollten zu einem besseren Verständnis der Regulation der weitverbreiteten Superfamilie von TRP-Ionenkanälen führen.

Gefördert durch DFG, VO 1741/1-1